Avaliação microscópica do sedimento urinário no exame deurina de rotina: comparação entre dois métodos / Microscopic evaluation of urinary sediment on routine urinalysis: comparison between two methods

Objetivo: O objetivo foi avaliar a concordância entre o método de sedimentoscopia proposto pela Associação Brasileira de Normas Técnicas e o método proposto pela Sociedade Brasileira de Patologia Clínica/Medicina Laboratorial. Métodos: A partir da urina de nove indivíduos, foram obtidas 72 amostras analisadas por ambos os métodos. Cada amostra foi examinada por quatro avaliadores. A concordância entre os métodos foi medida através do coeficiente de correlação de Pearson (r) para as variáveis contínuas e o coeficiente de concordância kappa (k) para as categóricas. Resultados: Houve concordância entre os métodos para a quantificação de cilindros leucocitários (97,2%, k = 0,61, p<0,01), e presença de cristais de oxalato de cálcio (77,8%, k = 0,43, p=0,04), cilindros hialinos (88,9%, k = 0,51, p=0,04), sais de uratos amorfos (83,3%, k = 0,59, p=0,03), fios mucosos (83,3%, k = 0,48, p=0,04) e leveduras (75,9%, k = 0,54, p=0,04). Os métodos tiveram correlação moderada quanto ao número de hemácias (r = 0,56, p=0,04) e células epiteliais (r = 0,73, p=0,04). Destaca-se um maior tempo de processamento e leitura da amostra para o método proposto pela SBPC/ML (23,4 min) quando comparado com o da ABNT NBR 15268 (16,6 min, p<0,01). Conclusão: Embora os métodos propostos tenham apresentado concordância entre muitos dos parâmetros avaliados, os principais achados associados a processos infecciosos e inflamatórios como bacteriúria e leucocitúria, comuns no exame de urina, precisam ser mais bem investigados. Além disso, é importante que, de acordo com a metodologia empregada, o tempo de processamento e a logística técnica/laboratorial sejam adequados.

Objective: Evaluate the conformity between sediment method suggested by Brazilian Association of Technical Norms and another method suggest by Brazilian Society of Clinical Pathology Laboratory Medicine. Methods: It was used urine from nine people, obtaining 72 samples analyzed by both methods. Four different researchers examined each sample. The conformity between these methods was measured by the Pearson correlation coefficient for continuous variables and kappa concordance coefficient for the category variables. Results: There was concordance between methods for quantification of leukocyte casts (97.2%, κ = 0.61, p < 0.01), calcium oxalate crystals presence (77.8%, κ = 0.43, p = 0.04), hyaline casts (88.9%, κ = 0.51, p = 0.04), amorphous urate crystals (83.3%, κ = 0.59, p = 0.03), mucus (83.3%, κ = 0.48, p = 0.04) and yeast (75.9%, κ = 0.54, p = 0.04). These methods had moderate correlation for erythrocytes number (r = 0.56, p = 0.04) and epithelial cells (r = 0.73, p = 0.04). It is still worth noting SBPC/ML method requests a larger processing time (23.4 minutes) when compared to ABNT NBR 15268 (16.6 minutes, p < 0.01). Conclusion: Although the proposed methods had presented conformity at the evaluate parameters, the most important results associated to infection and inflammatory processessuch as bacteriuria and leukocyturia, common at urine exams, need to b e more studied. Thus, it is important that, according to the used methodology, the processing time and technical/laboratory logistic needs to be adequate

Relationship between circulating VCAM-1, ICAM-1, E-selectin and MMP9 and the extent of coronary lesions

OBJECTIVES: Inflammatory molecules play a role in the development of atherosclerosis, which is the primary origin of cardiovascular disorders. However, to the best of our knowledge, no study has attempted to investigate the relationship between these circulating molecules and the prediction of cardiovascular risk. The present study aimed to investigate the relationships of vascular cell adhesion molecule-1, intercellular adhesion molecule-1, E-selectin and matrix metalloproteinase 9 serum concentrations with the extent of coronary lesions. METHODS: Seventy-four individuals who were undergoing coronary angiography for the first time for diagnostic purposes were enrolled in this study. The extent of the coronary lesion was assessed using the Friesinger Index, and subjects were classified into four groups: no lesions, minor lesions, intermediate lesions and major lesions. Serum biochemical parameters and serum concentrations of vascular cell adhesion molecule-1, intercellular adhesion molecule-1, E-selectin and matrix metalloproteinase 9 were analyzed. RESULTS: The vascular cell adhesion molecule-1 concentration was higher than 876 ng/mL in individuals with intermediate and major lesions (p<0.001 and p=0.020, respectively). Moreover, logistic regression analysis showed that these patients had an increased risk of having an intermediate lesion (p=0.007). Interestingly, all individuals with major lesions had vascular cell adhesion molecule-1 concentrations higher than 876 ng/mL. No association was found between the concentrations of the other proteins and the Friesinger Index. CONCLUSIONS: Serum vascular cell adhesion molecule-1 may be associated with the extent of coronary lesions. Moreover, it may represent an alternative to improve the cardiovascular risk classification in patients without acute coronary syndrome.

Association between kidney function and Framingham risk score in an admixed population of Brazil

ABSTRACT Chronic kidney disease (CKD) increases cardiovascular disease (CVD) risk development. However, the mechanisms of reduced kidney function with CVD risk are unclear. This study aimed to investigate the association between kidney function and Framingham risk score (FRS) in participants with traditional cardiovascular risk factors and normal estimated glomerular filtration rate (eGFR) > 60 mL/min/1.73 m² in an admixed population of Brazil. The participants were divided into three groups according to FRS: low risk group with 0% to <10%, moderate risk group with ≥10% to 20% and high risk group with >20%. The eGFR was calculated using Chronic Kidney Disease Epidemiology Collaboration (CKD-EPI). Data from participants were collected by questionnaire, and blood and urine samples were collected to analyze biochemical markers. A total of 214 subjects aged 53±10 years old was collected. There were 77 individuals in low risk group, 59 in moderate risk group and 78 in high-risk group. Mean eGFRCKD-EPI was 89.39±15.05 mL/min/1.73 m² and 90.74±16.17 mL/min/1.73 m2 when race adjustment. The results indicated that there is an increasing the cardiovascular risk with a decreased of eGFR, conforming to a significant inverse correlation observed between eGFR and FRS with Spearman correlation (R²=-0.256, p<0.001; R²=-0.224, p=0.001, when adjusted for race). There was a statistically significant difference in eGFRCKD-EPI (p<0.001) and eGFRCKD-EPI with race adjustment (p=0.002) among risk groups. The data suggests that the reduction eGFR is associated with elevated FRS among Brazilian adults without CKD. Furthermore, the results suggest that race adjustment it's not necessary in Brazilian population.

Avaliação d qualidade do DNA obtido de amostras preservadas em parafina / Quality evaluation of DNA from samples preserved in parafin

A obtenção de um material genético íntegro e com concentrações satisfatórias para a amplificação de de uma determinada sequência são os principais desafios para o processamento de amostras de tecido preservados em parafina. O presente estudo teve como objetivo comparar três diferentes protocolos de extração de DNA que têm em comum entre si o princípio de extração por silica-gel. Vinte e sete amostras de tecidos tireoidianos preservados em parafina foram processadas por meio de cortes em triplicata de 20um. O método A utilizou tr~es horas na etapa de digestão do tecido, os métodos B e C utilizaram 16 horas para a digestão, sendo que o último utilizou diferentes solventes para reidratar o tecido e solução de fenol-clorofórmio-álcool isoamílico para purificação. Todos os métodos utilizaram em comum o conjunto de reagentes QIAamp DNA mini kit. Na comparação entre as concentrações obtidas de DNA, o método B spresentou maior média (3,7 ng/iL) já o método A obteve valor médio que 1,2 ng/uL e o método C, de 0,7 ng/uL. Todos os protocolos obtiveram valores da relação 260/280 e 260/230 fora dos valores de refer~encia esperado, evidenciando uma perda na qualidade do DNA extraído. O resultado da integridade do DNA, por meio de eletroforese em gel agarose também demonstrou o alto grau de degradação de todos os métodos analisados. Entretanto, foi possível realizar a genotipagem do polimorfismo 174G>C do gene da interleucina 6 em 100% das amostras testadas para o método C, e 66% par a o método A e B. O método C foi o mais reprodutivo para genotipagem , apesar do maior custo e tempo de processamento, sendo este método mais indicado para a implementação na rotina laboratorial de biologia molecular para amostras preservadas em parafina.

Metabolismo de glicose em gêmeos monozigóticos discordantes para aptidão cardiorrespiratória / Glucose metabolism in discordant monozygotic twins for cardiorespiratory fitness / Metabolismo de glucosa en gemelos monocigóticos discordantes para aptitud cardiorrespiratoria

OBJETIVO: Verificar se as concentrações de glicose e insulina em jejum são reguladas pela aptidão cardiorrespiratória (VO2máx), independentemente dos efeitos genéticos. MÉTODOS: Dados de 38 pares de gêmeos monozigóticos (11 a 18 anos) foram analisados transversalmente. Os participantes foram submetidos a um teste de esforço máximo com ergoespirometria aberta (MedGraphics VO2000® - Medical Graphics Corp., St. Paul, MN) e à coleta de sangue para estimar a concentração de glicose e insulina em jejum. A zigosidade foi determinada por intermédio da investigação de concordância dos gêmeos em relação a 15 marcadores genéticos polimórficos. Nove pares demonstraram diferença média intrapar para o consumo máximo de oxigênio ≥10mL.kg-1.min-1 e foram divididos em dois grupos, de alta e baixa aptidão. Os grupos foram comparados a partir do teste pareado de Wilcoxon, tendo em vista a assimetria dos dados. RESULTADOS: Em média, os gêmeos do grupo de alta aptidão apresentaram consumo máximo de oxigênio 17% superior (13,5±3,7mL.kg-1.min-1) a seus irmãos menos aptos. Não houve diferença entre os grupos para as concentrações de insulina (36,5±34,6 versus 25,3±13,7mg/dL; p<0,813), porém, os gêmeos mais aptos demonstraram menor concentração de glicose do que seus contrapares menos aptos (82,9±7,3 versus 86,7±7,6mg/dL; p<0,010). CONCLUSÕES: Neste estudo, caracterizado como caso-controle (gêmeos monozigóticos discordantes), o irmão com menor aptidão cardiorrespiratória apresentou maior concentração de glicose em jejum, sugerindo que a baixa aptidão cardiorrespiratória está associada a distúrbios no metabolismo de glicose.

OBJECTIVE: To determine if glucose and insulin concentrations are regulated by cardiorespiratory fitness (VO2max) regardless of their genetic effects. METHODS: This cross-sectional study enrolled 38 pairs of young monozygotic twins (11 to 18 years-old). All subjects underwent a progressive maximal exercise test on a treadmill to determine the VO2max with gas exchange analysis (MedGraphics VO2000® - Medical Graphics Corp., St. Paul, MN). Blood samples were drawn after fasting to determine glucose and insulin levels. Monozygosity was confirmed by genotyping 15 informative genetic markers. Nine pairs had at least 10mL.kg-1.min-1 difference in VO2max and were divided into the more and less active group, according to their VO2max. Mean differences between more and less active groups were evaluated by Wilcoxon's test for paired data. RESULTS: On average, twins from the more active group presented a 17% (13.5±3.7mL.kg-1.min-1) higher VO2max compared to their less active siblings. No significant differences were observed between the groups for fasting insulin (36.5±34.6 versus 25.3±13.7mg/dL; p<0.813). However, the more active twins had lower fasting glucose than the less active ones (82.9±7.3 versus 86.7±7.6mg/dL; p<0.010). CONCLUSIONS: In this case-control study (discordant monozygotic twins), the less active co-twins were characterized by higher fasting plasma glucose levels. This implies that poor cardiorespiratory fitness can be associated with defective glucose metabolism regardless of genetic factors.

OBJETIVO: Verificar si las concentraciones de glucosa e insulina en ayuno son reguladas por la aptitud cardiorrespiratoria (VO2máx), independiente de los efectos genéticos. MÉTODOS: Datos de 38 pares de gemelos monocigóticos (11 a 18 años) fueron analizados transversalmente. Los participantes fueron sometidos a una prueba de esfuerzo máximo con ergoespirometría abierta (MedGraphics VO2000® Medical Graphics Corp., St. Paul, MN) y a la recolección de sangre para estimar la concentración de glucosa e insulina en ayuno. La cigosidad fue determinada por medio de la investigación de concordancia de los gemelos respecto a 15 marcadores genéticos polimórficos. Nueve pares demostraron diferencia mediana intrapares para el consumo máximo de oxígeno ≥10mL.kg-1.min-1 y fueron divididos en dos grupos, de alta y baja aptitud. Los grupos fueron comparados a partir de la prueba pareada de Wilcoxon, teniendo en vista la asimetría de los datos. RESULTADOS: En promedio, los gemelos del grupo de alta aptitud presentaron consumo máximo de oxígeno el 17% superior (13,5±3,7mL.kg-1.min-1) a sus hermanos menos aptos. No hubo diferencia entre los grupos para las concentraciones de insulina (36,5±34,6 versus 25,3±13,7mg/dL; p<0,813), pero los gemelos más aptos demostraron menor concentración de glucosa que sus contrapares menos aptos (82,9±7,3 versus 86,7±7,6mg/dL; p<0,010, respectivamente). CONCLUSIONES: En este estudio, caracterizado como caso-control (gemelos monocigóticos discordantes), el hermano con menor aptitud cardiorrespiratoria presentó mayor concentración de glucosa en ayuno, sugiriendo que la baja aptitud cardiorrespiratoria está asociada a disturbios en el metabolismo de glucosa.

Transcriptoma e proteoma em sangue periférico na busca de novos marcadores de doenças cardiovasculares / Transcriptomic and proteomic of peripheral blood as approaches to biomarkers cardiovascular discovers

INTRODUÇÃO: A principal manifestação clínica da doença aterosclerótica é o infarto agudo do miocárdio, caracterizada como emergência médica, que necessita de diagnóstico correto, rápido, preciso e terapia eficaz. Os estudos de transcriptoma e proteoma possibilitam obter informações que nos permite compreender de forma mais abrangente a evolução fisiopatológica das doenças, sendo as cardiovasculares particularmente favorecidas por terem etiologia multifatorial e sem dúvida multigênica, portanto a utilização destas ferramentas num modelo de doença aguda pode auxiliar, de forma singular, na obtenção de novas informações, tais como novos marcadores precoces de injúria. OBJETIVO: Identificar novos biomarcadores de doenças cardiovasculares através da análise do perfil de expressão de RNAm de células do sangue periférico e proteínas plasmáticas de pacientes com SCA. CASUÍSTICA E MÉTODOS: É um estudo caso-controle de pacientes com SCA recrutados no Pronto-Socorro do Instituto Dante Pazzanese de Cardiologia. Foram recrutados 84 indivíduos com Síndrome Coronariana Aguda (SCA), 47 indivíduos sem doença cardiovascular (grupo controle), de ambos os sexos com idade entre 30 a 65 anos, atendidos no Instituto Dante Pazzanese do Estado de São Paulo - Brasil. A avaliação de expressão gênica global de 10 pacientes e 6 controles (pareados) durante as primeiras 48 h após o IAM foi realizada através dos microarranjos de DNA (sistema Affymetrix) e a análise de plasma por separação em sistema de microarranjos (ProteinChip®), seguida da identificação e quantificação por espectrometria de massa, em sistema SELDI-TOF/MS. Os resultados de microarranjo de DNA foram validados tecnicamente (a partir das mesmas amostras processadas por microarranjo de DNA) e, posteriormente validados biologicamente (a partir das outras amostras não processadas por microarranjo de DNA) através da PCR em tempo real. RESULTADOS: Foram observados ao total 599 genes diferentemente expressos nas primeiras 48 h...

BACKGROUND: The main clinical manifestation of atherosclerosis is the acute myocardial infarction (AMI), which is a medical emergency that requires prompt diagnosis and efficient therapy. The transcriptomic and proteomic approaches are both powerful tools for the study of AMI and may be instrumental to identify news biomarkers involved in the inflammatory and apoptotic process of cardiovascular diseases. OBJECTIVE: The aim of this study is to determine the gene expression of RNAm and protein in blood cells following an AMI to identify new biomarkers. PATIENTS AND METHODS: For this study eighty four patients with acute coronary syndrome (ACS) and forty seven control individuals were selected among patients of the Instituto Dante Pazzanese, São Paulo state, Brazil. A global gene expression profile by GeneChip® Exon 1.0 ST Array (Affymetrix) and proteomic plasma profile by ProteinChip® Biomarker System and SELDI-TOF/MS were evaluated for ten patients from the ACS group and six from the control group. These patients were followed up for the first 48 h following the AMI. The genes differently expressed by microarray analysis were submitted to technical (same casuistic) and biologic (new casuistic) validation by PCR real time. RESULTS: 599 genes were differentially expressed at the first 48 h after AMI. Thirty-three genes were selected and submitted to the technical validation, and 20 were subjected to biological validation by real time PCR afterwards. The validated ones were: ALOX15, Areg, BCL2A1, BCL2L1, CA1, COX7B, ECDHC3, KCNE1, IL18R1, IRS2, MYL4, MMP9 and TREML4. At proteomic analysis, 479 peaks of plasma proteins differentially expressed were identified. 16 peaks were considered as high potentially biomarkers. Their molecular weight was between 6386.5 Da and 17807.7 Da. CONCLUSION: Results from this study were able to identify changes in gene and protein profiles in the plasma, and suggest new markers for evaluation of acute coronary syndrome and...